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食物中大腸菌群的檢測方法與步驟食物中大腸菌群的檢測方法與步驟

食物中大腸菌群的檢測方法與步驟

  • 發(fā)布時間:2021-06-02
  • 分類:技術(shù)文章

1、 適用范圍:
適用于各種食品、原料及純水樣品中含有大腸菌群的快速測定。


2、 方法原理:
將乳糖、顯影劑和選擇性培養(yǎng)基分別裝入一張紙上。經(jīng)過培養(yǎng),可以在紙上生長并發(fā)酵乳糖產(chǎn)生酸的細(xì)菌被認(rèn)為是大腸菌群陽性。稀釋度大腸菌群陽性紙片數(shù),根據(jù)大腸菌群MPN表找出相應(yīng)的大腸菌群數(shù)。


3、方法特點(diǎn):
與國標(biāo)法中的九管法相對應(yīng),實(shí)驗的最初步驟簡化為一步,和從78 h時間縮短到不到24 h,不再需要大量的輔助設(shè)施如培養(yǎng)基的制備、消毒和清潔文化的血管。工作時,可以隨時打開包裝進(jìn)行取樣和測試。


4、操作方法
(1)樣品處理:無菌重25克(或25毫升)的樣本采樣瓶或均化杯含有225毫升無菌生理鹽水,徹底擺脫1:10樣品勻漿,并使用1毫升,消除細(xì)菌吸管1:10樣品勻漿,將它注入試管中包含9毫升無菌生理鹽水,搖動試管,稀釋1:100。通過類推,每次稀釋都要更換一根無菌吸管。
(2)接種:選擇兩種稀釋液接種。普通食品一般用1:10和1:10的兩種稀釋劑,而飲料和飲用水則用1:10的兩種稀釋劑。每一部分由三張大紙(連接到10mL)和六張小紙(連接到1mL)組成。每張大紙與每袋兩張紙疊放時視為一張紙。用無菌移液管抽取1:10稀釋的10ml,放入裝有一張大紙(相當(dāng)于1g樣品)的塑料袋中,吸收后平放,重復(fù)三次。然后用1mL無菌移液管抽1mL同樣的稀釋液,涂于裝有一張0.1g樣品的小紙片的塑料袋上,重復(fù)三次。另取1ml無菌移液管,抽取1ml 1:100稀釋液,置于裝有小紙片(相當(dāng)于0.01g樣品)的塑料袋中,重復(fù)三次。
(3)培養(yǎng):將接種紙(可堆疊)置于37℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)15h-24h。


5. 結(jié)果判斷和計數(shù):

如果紙張變黃或黃色背景上出現(xiàn)紅點(diǎn),則為大腸菌群陽性。紙張保持相同的紫藍(lán)色或在紫藍(lán)色的背景上出現(xiàn)紅點(diǎn),但沒有黃色的周圍的紙張是陰性的大腸菌群。

記錄每種稀釋液中陽性大腸菌群數(shù)量,根據(jù)大腸菌群MPN表找出相應(yīng)的大腸菌群數(shù)量。如果接種液的第一次稀釋是原溶液,在桌面上找到的結(jié)果應(yīng)除以10,以此類推。


6. 注意事項:

當(dāng)樣品的pH值低于pH 7時,應(yīng)先用1mol/L無菌氫氧化鈉(NaOH)將溶液調(diào)至中性,以免pH值引起紙張泛黃,影響觀察結(jié)果。

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